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La técnica de la siembra en espiral
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El principio de la siembra exponencial en espiral
La técnica de siembra en espiral es un método normalizado de enumeración con una siembra que estandariza el método pasteuriano.
Se deposita una muestra en la superficie de una placa de Petri giratoria mediante una jeringa de alta precisión en una espiral de Arquímedes logarítmicamente decreciente desde el centro de la placa hacia su periferia. Esto permite obtener 4 logaritmos de dilución en la misma placa, proporcionando una dispersión por agotamiento. El volumen se calibra y se conoce en todos los puntos de la placa de Petri.
En el método de referencia, se realizan cuatro diluciones sucesivas y se siembra la 4ª dilución para obtener una placa interpretable. La técnica de la espiral permite aquí sembrar directamente la solución madre.
La siembra manual es un método con acciones repetitivas: al menos 4 diluciones y 4 siembras consecutivos para obtener una sola placa de Petri interpretable.
Con este método, ¡realice sus análisis utilizando una sola placa de Petri!
Comparación entre el método clásico y la técnica de la siembra en espiral
La técnica en espiral es un modo de siembra superficial. Es similar a los métodos horizontales utilizados habitualmente en los laboratorios. En comparación con los métodos de referencia, las pruebas interlaboratorios como RAEMA muestran que no hay diferencias estadísticamente significativas entre ambos métodos.
A continuación se presenta un estudio comparativo entre el método de referencia y la técnica de siembra en espiral:
Objetivo: Estudiar la fiabilidad de la siembra easySpiral / easySpiral Pro en modo exponencial decreciente (denominada técnica de siembra en espiral) realizando un estudio comparativo con el método de referencia "siembra superficial manual" (denominado método clásico).
Conclusiones: Nuestros resultados muestran que existe una fuerte correlación (R2 = 0.989) entre la técnica de la siembra en espiral realizada por easySpiral y el método clásico. Además, la diferencia media en log CFU/mL entre los dos métodos es 12 veces inferior a la diferencia máxima, por lo que no es significativa.
Línea de correlación entre el recuento de Escherichia coli (en Log CFU/mL) obtenido por chapoteo con la espiral y los métodos convencionales.
Ejemplo de diferentes concentraciones de Escherichia coli, sembradas en medio MacConkey, utilizando la técnica de sembrado en espiral.
2.6 x 103
1.3 x 104
2.6 x 104
1.3 x 105
2.6 x 105
¿Está normalizada la técnica de siembra en espiral?
Sí, es una técnica estándar mencionada en las normas ISO 7218 o ISO 4833-2 para la enumeración de la flora mesófila total. Además, también está presente en el mercado estadounidense en la FDA y la AOAC.
De ISO 4833-2: "Este anexo especifica un método para el recuento de microorganismos en alimentos, piensos y muestras ambientales utilizando un dispositivo de chapado en espiral."
De la FDA - BAM: "El método de recuento en placa en espiral (SPLC) para microorganismos en leche, alimentos y cosméticos es un método oficial de la APHA y la AOAC."
¿Cómo contar?
La concentración bacteriana se determina dividiendo el número de colonias contadas por el volumen chapado por sector. Las CFU pueden contarse manualmente (utilizando un ábaco o cualquier contador de colonias manual) o automáticamente utilizando cualquier contador de colonias automático Scan.
Método manual
La lectura de la técnica de siembra en espiral requiere un Ábaco suministrado con el sembrador easySpiral.
Este ábaco está dividido en 4 cuadrantes: A | A | B | B. Cada cuadrante se subdivide en 6 sectores.
Contar 20 colonias empezando por el sector 1 (sector más diluido), luego seguir contando hasta alcanzar al menos 20 colonias y terminar de contar todas las colonias en este sector.
Completa el recuento del sector que contiene la vigésima colonia.
Cuenta las colonias en los mismos sectores del cuadrante opuesto.
Suma el número de colonias de estos dos diales: (n1 + n2) = N
Dividir N por el volumen de sectores leídos y contados: V (volúmenes acumulados proporcionados por el proveedor).
Multiplicar por un factor de dilución si es necesario: D
Convierta µL a mL multiplicando por un factor de 1000.
Concentración bacteriana: C en CFU/mL.
Método alternativo
En lugar de utilizar la fórmula de recuento en espiral, consulte los apéndices del manual del usuario.
Tabla de resultados
Método automático
Interscience ofrece una gama de contadores de colonias que permiten enumerar la técnica Spiral de forma automatizada.
Incubación y recuento en tiempo real
ScanStation 100 | ScanStation 200 | ScanStation 300
Técnica de revestimiento en espiral: 45 años de experiencia
Desde hace 45 años, las máquinas automáticas de siembra en espiral Interscience son una referencia para los laboratorios alimentarios, médicos, de investigación, cosméticos, farmacéuticos y probióticos de todo el mundo.
1973
La técnica de siembra de muestras en espiral fue inventada por el Dr. Ed Campbell, investigador de la FDA (Food and Drug Administration) en Cincinnati (EE.UU.).
1979
Launching of the Spiral DS plater
1992
El Dr. Ed. Campbell y François Jalenques, fundador de Interscience, patentan conjuntamente una versión actualizada de la técnica de metalización en espiral.
1996
Lanzamiento de la máquina de metalizado Spiral DS +
2010
Interscience lanza easySpiral y easySpiral Pro con una arquitectura completamente nueva: más rápido, más fácil de usar.
Preguntas frecuentes
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¿Tengo que cambiar de proveedor de medios?
Los consumibles no son cerrados, por lo que no hay obligación de cambiar de proveedor de medios. Sin embargo, los medios deben contener entre 12 y 15 gramos por litro de agar. El Interscience easySpiral dispone de un contrapeso en la torreta que sujeta el estilete, lo que permite adaptarlo a todos los agar, incluso a los vertidos a mano.
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¿Tengo que trabajar en un entorno estéril?
Con la técnica de siembra en espiral, se recomienda trabajar en un entorno estéril, bajo una cabina de seguridad microbiológica (BSC) o en una campana de flujo laminar. Para los laboratorios que no tienen la posibilidad de trabajar en estas condiciones, recomendamos colocar el autómata cerca de un mechero Bunsen. Interscience también ofrece una protección de carcasa que se puede colocar en el easySpiral para evitar el flujo de aire en la plataforma de trabajo.
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¿Qué microorganismos se pueden sembrar
Todos los microorganismos que habitualmente se depositan en la superficie pueden depositarse con la técnica de siembra en espiral tras su validación por el laboratorio.
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¿Cuántas diluciones se tienen en cuenta y se visualizan con la técnica de siembra en espiral?
La técnica de siembra en espiral permite obtener el equivalente de 4 logs de dilución en la misma placa de Petri: la muestra madre y tres diluciones consecutivas de esta muestra. Las diluciones en espiral se visualizan esparciendo un volumen linealmente decreciente del inóculo en una espiral de Arquímedes, que está muy concentrado en el centro y mucho menos en el borde.
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¿Cuáles son los ámbitos de aplicación de la técnica de en espiral?
La técnica de siembra en espiral puede utilizarse en diversos campos de aplicación, como el procesado de alimentos para la enumeración de criterios de calidad de todas las matrices, incluso las coloreadas o la leche como materia prima. También puede utilizarse para realizar estudios de cinética bacteriana. La técnica de siembra en espiral puede utilizarse en el campo de la farmacología o la cosmetología para pruebas de desafío, I+D, control de calidad y pruebas de fertilidad/esterilidad.
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¿Cuáles son las ventajas de la técnica del siembra en espiral?
La técnica de siembra en espiral tiene varios intereses:
- Normalización del método pasteuriano
- Control del coste de adquisición de medios/consumibles no cautivos
- Reducción del stock de medios inmovilizados
- Guarda la experiencia científica en el laboratorio
- Libertad para validar cualquier parámetro en el laboratorio con la técnica de siembra en espiral
- Compatible con cualquier tipo de muestra, incluso coloreada
- Procesamiento más rápido de las muestras en menos tiempo
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¿Qué criterios de higiene podemos buscar con la técnica de siembra en espiral?
Los criterios aceptados con la técnica de siembra en espiral dependen de los umbrales de detección. Se puede utilizar cualquier criterio por encima de 100 CFU (sujeto a validación por parte del laboratorio) excepto para anaerobios estrictos que deben inocularse en doble capa. Los estudios científicos valoran y aprueban la técnica de siembra en espiral en el laboratorio.
