La technique d’ensemencement Spiral est une méthode normée de dénombrement via un ensemencement qui standardise la méthode pasteurienne.
Un échantillon est déposé à la surface d’une boite de Petri en rotation par une seringue de haute précision, selon une spirale d’Archimède logarithmiquement décroissante, du centre de la boite à sa périphérie. Elle permet d’avoir quatre log de dilutions sur une même boite, fournissant un étalement par épuisement. Le volume est calibré et connu en tous points de la boite de Petri.
Sur la méthode de référence, on effectue quatre dilutions successives et on ensemence la 4e dilution pour avoir une boite interprétable. La technique spiral nous permet d’ensemencer directement l’échantillon mère.
La technique Spiral est un ensemencement en surface. Elle est similaire aux méthodes horizontales utilisées couramment en laboratoire. Comparable aux méthodes de référence, les tests interlaboratoires comme le RAEMA démontrent l’absence d’erreur significative entre ces deux méthodes.
Voici une étude comparative entre la méthode de référence et la technique Spiral :
Objectif : Etudier la fiabilité de l’ensemencement de l’easySpiral / easySpiral Pro en mode exponentiel décroissant (dite méthode Spiral) en procédant à une étude comparative avec la méthode de référence « ensemencement manuel en surface » (dite méthode classique).
Conclusion : Nos résultats montrent une forte corrélation (R2 ≥ 0,989) entre l’ensemencement en mode Spiral par l’easySpiral et la méthode classique. Aussi la moyenne de la différence des logs UFC/mL entre les deux méthodes est 12 fois inférieure à l’écart maximal, donc non significatif.
Droite de corrélation entre le dénombrement d’Escherichia coli (en Log UFC/mL) obtenu par ensemencement avec la technique Spiral et la méthode classique
C’est une technique normée mentionnée sous l’ISO 7218 ou l’ISO 4833-2 pour le dénombrement de la flore totale mésophile. Elle est aussi sur le marché américain présente dans la FDA et l’AOAC.
Extrait de la norme ISO 4833-2 : « La présente annexe spécifie une méthode de dénombrement des micro-organismes présents dans les aliments, les aliments pour animaux, et les échantillons d’environnement, au moyen d’un dispositif d’ensemencement en spirale. »
Extrait du FDA - BAM : « The spiral plate count (SPLC) method for microorganisms in milk, foods, and cosmetics is an official method of the APHA and the AOAC. »
La lecture de la technique Spiral nécessite un Abac fourni avec l’ensemenceur easySpiral.
Cet abac est découpé en 4 cadrans : A | A | B | B. Chaque cadran est représenté par différents secteurs.
Compter 20 colonies en commençant par le secteur 1 (secteur le plus dilué) puis compter jusqu’au secteur de la 20e colonie.
Terminer le comptage du secteur contenant la 20e colonie.
Compter les colonies dans les mêmes secteurs du cadran opposé.
Additionner le nombre de colonies de ces deux cadrans : (n1 + n2) = N
Diviser N par le volume des secteurs lus et comptés : V (volumes cumulés fournis par le fournisseur).
Multiplier par un facteur de dilution si nécessaire : D
Convertir les µL en mL en multipliant par le facteur 1000.
Concentration bactérienne : C en UFC/mL.
Au lieu d’utiliser la formule de comptage Spiral, vous pouvez vous référer aux annexes du manuel d’utilisation.
Tableau des résultats
Interscience propose une gamme de compteurs de colonies qui permettent de dénombrer la technique Spiral de façon automatisée.
Incubation et comptage en temps réel
ScanStation 100 | ScanStation 200 | ScanStation 300
La technique Spiral d’ensemencement de l’échantillon est inventée par le Dr Ed Campbell, chercheur à la FDA (Food and Drug Administration) à Cincinnati, USA.
Lancement ensemenceur
Spiral DS
Dr Ed. Campbell et François Jalenques, fondateur d’Interscience, brevètent ensemble une version mise à jour de la méthode Spiral.
Lancement ensemenceur
Spiral DS +
Interscience lance easySpiral et easySpiral Pro avec une toute nouvelle architecture : plus rapides, plus simple d’utilisation.
La technique d’ensemencement Spiral a plusieurs intérêts :