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La technique d’ensemencement Spiral
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Le principe de l’ensemencement exponentiel Spiral
La technique d’ensemencement Spiral est une méthode normée de dénombrement via un ensemencement qui standardise la méthode pasteurienne.
Un échantillon est déposé à la surface d’une boite de Petri en rotation par une seringue de haute précision, selon une spirale d’Archimède logarithmiquement décroissante, du centre de la boite à sa périphérie. Elle permet d’avoir quatre log de dilutions sur une même boite, fournissant un étalement par épuisement. Le volume est calibré et connu en tous points de la boite de Petri.
Sur la méthode de référence, on effectue quatre dilutions successives et on ensemence la 4e dilution pour avoir une boite interprétable. La technique spiral nous permet d’ensemencer directement l’échantillon mère.
L’ensemencement manuel est une méthode aux actions répétitives : au moins 4 dilutions et 4 ensemencements successifs pour n’obtenir qu’une boite de Petri exploitable.
Grâce à la méthode automatique Spiral, réalisez votre analyse avec une seule boite de Petri !
Comparatif entre la méthode de référence et la technique d’ensemencement Spiral
La technique Spiral est un ensemencement en surface. Elle est similaire aux méthodes horizontales utilisées couramment en laboratoire. Comparable aux méthodes de référence, les tests interlaboratoires comme le RAEMA démontrent l’absence d’erreur significative entre ces deux méthodes.
Voici une étude comparative entre la méthode de référence et la technique Spiral :
Objectif : Etudier la fiabilité de l’ensemencement de l’easySpiral / easySpiral Pro en mode exponentiel décroissant (dite méthode Spiral) en procédant à une étude comparative avec la méthode de référence « ensemencement manuel en surface » (dite méthode classique).
Conclusion : Nos résultats montrent une forte corrélation (R2 ≥ 0,989) entre l’ensemencement en mode Spiral par l’easySpiral et la méthode classique. Aussi la moyenne de la différence des logs UFC/mL entre les deux méthodes est 12 fois inférieure à l’écart maximal, donc non significatif.
Droite de corrélation entre le dénombrement d’Escherichia coli (en Log UFC/mL) obtenu par ensemencement avec la technique Spiral et la méthode classique
Exemple de différentes concentrations de la technique d’ensemencement Spiral d’Escherichia coli sur MacConkey
2,6 x 103
1,3 x 104
2,6 x 104
1,3 x 105
2,6 x 105
La technique d’ensemencement Spiral est-elle normée ?
C’est une technique normée mentionnée sous l’ISO 7218 ou l’ISO 4833-2 pour le dénombrement de la flore totale mésophile. Elle est aussi sur le marché américain présente dans la FDA et l’AOAC.
Extrait de la norme ISO 4833-2 : « La présente annexe spécifie une méthode de dénombrement des micro-organismes présents dans les aliments, les aliments pour animaux, et les échantillons d’environnement, au moyen d’un dispositif d’ensemencement en spirale. »
Extrait du FDA - BAM : « The spiral plate count (SPLC) method for microorganisms in milk, foods, and cosmetics is an official method of the APHA and the AOAC. »
Comment compter ?
La concentration bactérienne est déterminée en divisant le nombre de colonies trouvées par le volume déposé sur un même secteur de la boite, soit manuellement, soit en utilisant un compteur automatique de colonies.
Méthode manuelle
La lecture de la technique Spiral nécessite un Abac fourni avec l’ensemenceur easySpiral.
Cet abac est découpé en 4 cadrans : A | A | B | B. Chaque cadran est représenté par différents secteurs.
Compter 20 colonies en commençant par le secteur 1 (secteur le plus dilué) puis compter jusqu’au secteur de la 20e colonie.
Terminer le comptage du secteur contenant la 20e colonie.
Compter les colonies dans les mêmes secteurs du cadran opposé.
Additionner le nombre de colonies de ces deux cadrans : (n1 + n2) = N
Diviser N par le volume des secteurs lus et comptés : V (volumes cumulés fournis par le fournisseur).
Multiplier par un facteur de dilution si nécessaire : D
Convertir les µL en mL en multipliant par le facteur 1000.
Concentration bactérienne : C en UFC/mL.
Méthode alternative
Au lieu d’utiliser la formule de comptage Spiral, vous pouvez vous référer aux annexes du manuel d’utilisation.
Tableau des résultats
Méthode automatique
Interscience propose une gamme de compteurs de colonies qui permettent de dénombrer la technique Spiral de façon automatisée.
Incubation et comptage en temps réel
ScanStation 100 | ScanStation 200 | ScanStation 300
Technique Spiral : 45 ans d’expérience
Depuis 45 ans, les ensemenceurs Spiral automatiques Interscience sont une référence dans le monde entier pour les laboratoires alimentaires, médicaux, de recherche, cosmétiques, pharmaceutiques et probiotiques.
1973
La technique Spiral d’ensemencement de l’échantillon est inventée par le Dr Ed Campbell, chercheur à la FDA (Food and Drug Administration) à Cincinnati, USA.
1979
Lancement ensemenceur
Spiral DS
1992
Dr Ed. Campbell et François Jalenques, fondateur d’Interscience, brevètent ensemble une version mise à jour de la méthode Spiral.
1996
Lancement ensemenceur
Spiral DS +
2010
Interscience lance easySpiral et easySpiral Pro avec une toute nouvelle architecture : plus rapides, plus simple d’utilisation.
Questions fréquentes
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Dois-je changer mon fournisseur de milieu de culture ?
Les consommables ne sont pas captifs, il n’y a donc pas d’obligation de changer de fournisseur de milieux. Le milieu doit cependant contenir entre 12 et 15 grammes par litre d’agar. L’easySpiral d’Interscience a un contrepoids au niveau de la tourelle maintenant le stylet qui permet de s’adapter à toutes les geloses, même coulées à la main.
-
Dois-je travailler en environnement stérile ?
Avec la technique d’ensemencement Spiral, il est conseillé de travailler sous environnement stérile, sous un PSM ou sous une hotte. Pour les laboratoires n’ayant pas cette possibilité de travailler dans ces conditions, nous conseillons dans ce cas de placer l’automate près d’un bec Bunsen. Interscience propose également une coque de protection que l’on place sur l’easySpiral qui permet d’éviter les flux d’air sur la plateforme de travail.
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Quels germes peut-on ensemencer ?
Tous les germes ensemencés en surface habituellement peuvent être ensemencés avec la technique Spiral sous réserve de validation par le laboratoire.
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Combien de dilutions sont prises en compte et visualisées avec la technique d’ensemencement Spiral ?
La technique d’ensemencement Spiral permet d’avoir l’équivalent de 4 logs de dilutions sur une même boite : l’échantillon mère et trois dilutions successives de cet échantillon. Les dilutions de la technique Spiral sont visualisées via l’étalement par épuisement de l’inoculum selon la spirale d’Archimède, c’est très concentré au centre et de moins en moins en périphérie.
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Quels sont les domaines d’applications de la technique d’ensemencement Spiral ?
La technique d’ensemencement Spiral peut être utilisée dans différents domaines d’applications comme l’agroalimentaire pour le dénombrement des critères de qualité de toutes les matrices même colorées. Elle peut être aussi utilisée pour réaliser des cinétiques bactériennes ou encore des analyses de lait en tant que matière première. La technique d’ensemencement Spiral s’intègre dans le domaine de la pharmacologie ou cosmétologie pour les challenge tests, les contrôles R&D ou contrôles qualité et les tests de fertilité/stérilité.
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Quels sont les intérêts de la technique d’ensemencement Spiral ?
La technique d’ensemencement Spiral a plusieurs intérêts :
- Standardisation de la méthode pasteurienne
- Maîtrise des coûts d’achats de milieux/consommables non captifs
- Réduction des stocks de milieux immobilisés
- Maintien de l’expertise scientifique dans le laboratoire
- Liberté de valider n’importe quel paramètre au laboratoire avec la technique Spiral
- Compatible avec tout type d’échantillon même coloré
- Traitement plus rapide des échantillons en moins de temps.
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Quels critères d’hygiène peut-on rechercher avec la technique d’ensemencement Spiral ?
Les critères acceptés avec la technique d’ensemencement Spiral dépendent des seuils de détection. Tout critère supérieur à 100 UFC peuvent être utilisés (sous validation par le laboratoire) excepté les anaerobies strictes qui doivent être ensemencées en double couche. Les études scientifiques valorisent et approuvent la technique Spiral au sein du laboratoire.
