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スパイラル
指数関数的塗抹の原理
スパイラル塗抹法は、パスツール・メソッドを標準化した塗抹によるスタンダード化された菌数測定法です。
サンプルは、高精度シリンジによって回転シャーレの表面上に、シャーレの中心から周辺に向かって対数的に減少するアルキメデス螺旋状に塗抹されます。
同じシャーレ上に菌液を最後まで塗抹することにより、4ログの希釈をすることが可能です。塗抹される容積はシャーレのすべての点で決められていて、既知です。
マニュアル塗抹法では、4回連続的な希釈を行い、通常4回目の希釈液を塗抹して解釈可能なシャーレを得ます。 ここではスパイラルのテクニックにより、マザーサンプルを直接塗抹することができます。
マニュアル式プレーティングは、少なくとも 4回の希釈と 4回の連続プレーティングを繰り返し、読み取り可能なシャーレ 1枚を得る方法です。
自動スパイラルメソッドにより、シャーレ 1枚だけで分析を行います！
従来法とスパイラル法の比較
スパイラル塗抹法は表面塗抹法です。 これは、研究室で一般的に使用される水平法に似ています。参照法と比較して、RAEMA などの異なる研究所間テストでは、これら 2 つの方法の間に有意な誤差がないことが実証されています。
以下は、参照法とスパイラル法の比較研究です :
目的: 減少する指数モード（いわゆるスパイラル法）でのeasySpiral / easySpiral Pro による塗抹の信頼性を、「マニュアル式表面塗抹」（いわゆる従来法）との比較研究を行うことによって検証します。
結論: 結果は、easySpiral によるスパイラル法での塗抹と従来法との間に強い相関関係 (R2 = 0.989) を示しています。 また、2 つの方法間の log CFU/mL の対数差の平均は最大差異に比べて12倍小さく、したがって有意ではありません。
スパイラル法を用いたプレーティングにより得られた大腸菌数（単位：Log CFU/mL）と従来法との相関線
スパイラル法を用いた、異なる濃度の大腸菌のマッコンキー培地へのプレーティング例
2.6 x 103
1.3 x 104
2.6 x 104
1.3 x 105
2.6 x 105
スパイラル塗抹テクニックはスタンダード化されていますか？
これは、中温性総菌数の計測について、ISO 7218またはISO 4833-2の下で言及されているスタンダード化された技術です。また、これはアメリカ市場において、FDAやAOACで採用されています。
ISO 4833-2 からの抜粋:「 本付属書は、食品、動物用飼料、環境サンプルに存在する微生物をスパイラル塗抹装置を用いてカウントする方法を規定しています。」
FDA - BAM からの抜粋:「 乳、食品、化粧品中の微生物に関するスパイラルプレートカウント (SPLC) 法は、APHAおよびAOACの公定法です。」
どのように数えますか？
菌の濃度は、見つけられたコロニーの数をシャーレの同一セクターに塗抹された体積で割ることで決定されます。これはマニュアル式に行うか、あるいは自動コロニーカウンターを使用して行います。
マニュアル式
スパイラル塗抹テクニックの読み取りには、イージースパイラル塗抹装置に付属のアバカス (算盤) が必要です。
このアバカスは4つの象限に分けられており、A | A | B | B です。各象限は6つのセクターにさらに細分されています。
セクター1（最も希薄なセクター）から20コロニーを数え、少なくとも20コロニーに達するまで数え続け、このセクターですべてのコロニーを数え終わります。
20番目のコロニーを含むセクターのカウントを完了します。
反対側の象限の同じセクターのコロニーを数えます。
これら2つのダイヤルのコロニー数を合計します： (n1 + n2) = N
Nを、読み取ってカウントしたセクターの体積で割ります： V（供給者から提供された累積量）。
必要に応じて希釈倍率をかけます：D
µLからmL に1000倍をして変換します。
細菌濃度：C (CFU/mL)
代替方法
スパイラル・カウント式を使用する代わりに、ユーザーマニュアルの付録を参照してください。
結果表
自動式
インターサイエンスは、自動化された方法でスパイラル式塗抹をされたシャーレのコロニー数を測定できるコロニーカウンター・シリーズを提供しています。
リアルタイム インキュベーション及びカウンティング
ScanStation 100 | ScanStation 200 | ScanStation 300
スパイラル式プレーティング技術：45年の経験
45年にわたり、Interscience社の自動スパイラルプレーターは、世界中の食品、医療、リサーチ、化粧品、製薬、プロバイオティクスの研究室で使用されています。
1973
米国シンシナティにあるFDA（食品医薬品局）の研究者エド・キャンベル博士により、スパイラル法によるサンプル塗抹方式が発明されました。
1979
スパイラルDSプレーター発売
1996
スパイラルDS＋塗抹装置発売
よくある質問
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培地サプライヤーを変更する必要がありますか？
消耗品に拘束力はないので、培地業者を変える義務はありません。ただし、培地は寒天を 1リットルあたり12～15グラム含む必要があります。インターサイエンスの easySpiral は、スタイラスを保持するタレット部分に調整用おもりを備えていて、手作業で注がれた物を含むあらゆる寒天培地に適応します。
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無菌環境で働かなければなりませんか？
スパイラル塗抹法では、微生物学的安全キャビネット(BSC) またはラミナーフロー・フードの下、無菌環境で作業することを推奨しています。このような条件下で作業できないラボラトリーでは、機器をベンゼンバーナーの近くに設置することをお勧めします。 インターサイエンスはまた、作業台上の空気の流れを防ぐために easySpiral 上に設置できる保護ハウジングも提供しています。
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どのような微生物を塗抹できますか？
通常、表面に塗抹されるすべての微生物は、検査室でのバリデーション後、スパイラルプレーティング技術で塗抹することができます。 -
スパイラルプレーティング法では、何倍希釈が考慮され、可視化されますか？
スパイラルプレーティング法により、同じシャーレ上で 4ログに相当する希釈が可能になります。 スパイラル希釈は、アルキメデスの螺旋形に線状に減少する量の塗抹液を広げることで可視化されます。
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スパイラルプレーティング法の応用分野は？
スパイラルプレーティング法は、色付きのものや生乳などの原材料であっても、全てのマトリックスの品質基準の列挙のために食品加工など様々な分野で使用することができます。また、微生物の動態研究を行うためにも利用可能です。スパイラルプレーティング法は、薬理学や化粧品の分野でも、チャレンジ・テスト、研究開発、品質管理及び生殖能/無菌テストにも使用されます。
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スパイラルプレーティング法の利点は？
スパイラルプレーティング法にはいくつかの優位点があります：
- パスツール・メソッドのスタンダード化
- 非専用の培地・消耗品の購入コストの管理
- 在庫にある培地の削減
- 研究所における科学的専門知識の維持
- スパイラル技術を用いて、実験室で任意のパラメーターを自由に検証する権利
- あらゆる種類のサンプルに対応 (着色サンプルも可)
- より短時間でのサンプル処理の迅速化
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スパイラルプレーティング法で調査できる衛生基準は？
スパイラルプレーティング法で認められる基準は、検出閾値に依存し、100CFU を超えるすべての基準が使用可能です(ラボラトリーによる検証の下で）。ただし、厳密嫌気性菌は二重層で塗抹する必要があります。科学的研究は、ラボラトリー内でスパイラルプレーティング法を評価し承認しています。
